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細胞課堂|巨噬細胞的培養方法

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細胞·簡介



?單核細胞及由單核細胞演變而來的具有吞噬功能的巨噬細胞,稱為單核吞噬細胞系統。單核細胞發生于骨髓的多能干細胞,循環于血液中,穿透血管內皮進入組織內,轉變為巨噬細胞。單核吞噬細胞系統在體內分布廣,細胞數量多,主要分布于疏松結締組織、肝、脾、淋巴結、骨髓、腦、肺以及腹膜等處,并依其所在組織的不同而有不同的名稱。

?單核吞噬細胞系統的細胞有很強的吞噬能力醫學|教育網整理,能吞噬異物、細菌、衰老和突變的細胞等。此外,也吞噬抗原抗體復合物,并參與脂質與膽固醇代謝,可吞噬和蓄積脂質。吞噬的生理意義在于消除體內不需要的物質,其中巨噬細胞與淋巴細胞、粒細胞、肥大細胞,在功能上,有互相促進和互相抑制的作用。當單核吞噬細胞系的生理功能失調時,可引起多種疾病。

?巨噬細胞(英語:Macrophages,縮寫為m?)是一種位于組織內的白血球,源自單核細胞,而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞,在脊椎動物體內參與非特異性防衛(先天性免疫)和特異性防衛(細胞免疫)。它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用(即吞噬以及消化),并激活淋巴球或其他免疫細胞,令其對病原體作出反應。巨噬細胞屬免疫細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞容易獲得,便于培養,并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群,在條件適宜下可生活2-3周,多用做原代培養,難以長期生存。

名稱

J7 74小鼠巨噬細胞

形態不規則形
傳代方法1:2傳代,2~3天換液
營養體系DMEM高糖培養基+10%FBS+1%雙抗


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細胞的主要特點


科學家以基因改造的方式,讓老鼠的轉型生長因子β,無法對在外周循環中的巨噬細胞發出訊號。科學家發現,如此做后,外周循環的巨噬細胞會大舉進入老年失智癥老鼠的大腦中。

康乃狄克州耶魯大學醫學院陶恩說,外周循環巨噬細胞滲透大腦的動作,即是老年失智癥老鼠的療方。這項結果大出陶恩意料。之前科學家的論點是,提高大腦的免疫反應可能加重發炎,因而對病情有害。實驗中,基改老鼠的腦斑有九成消失無蹤,而且老鼠的官能反應也獲得改善,例如走迷宮不再那么容易迷失方向。陶恩說,若科學家能以藥物,封阻人體外周循環中的轉型生長因子β,應該也能達到動員外周巨噬細胞進入大腦,清除老人斑的目的。陶恩的研究團隊已將研究重心,改為尋找可封阻轉型生長因子β 的藥物。


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培養方法


巨噬細胞也建有無限細胞系,大多來自小鼠,如P338D1、S774A.1、RAW309Cr.l等,均獲惡性,培養中呈巨噬細胞形態和吞噬功能,易于傳代和瓶壁分離,但難以建株。培養巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞,以小鼠腹腔取材法最為實用,其法如下:

1、實驗前三天,向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml(勿注入腸內)。

2、引頸殺死動物,手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3~5秒。

3、置動物于解剖臺上,用針頭固定四肢,雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側,暴露出腹膜,但勿傷及腹膜壁。

4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中,同時從兩側用手指揉壓腹膜壁,令液體在腹腔內充分流動。

5、用針頭輕輕挑起腹壁,使動物體微傾向一側,使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內。

6、小心拔出針頭,把液體注入離心管中,250g4℃離心10分鐘,去上清,加10mlEagle培養基。

7、計數細胞,每只小鼠可產生20~30×105細胞,其中90%為巨噬細胞。

8、為獲取3×105帖附細胞/平方厘米,需接種2.5×106/ml。

9、為純化培養細胞,去除其它白細胞,接種數小時后,去除培養液,用Eagle液沖洗1~2次后,再加新Eagle培養液置37℃CO2溫箱中培養。

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巨噬細胞產生的細胞因子有那些?


巨噬細胞是一種位于組織內的白血球。它能吞噬和消化病原體以及組織崩解產物,這個過程稱吞噬作用。它們通常存在于所有的組織中,其主要功能是清除所有死亡的細胞和組織。此外,巨噬細胞有迅速分泌多種炎癥介質,影響炎癥反應的發展。巨噬細胞因子是指巨噬細胞產生的一系列細胞因子,包括促炎細胞因子、抗炎細胞因子和趨化因子。
促炎細胞因子

當巨噬細胞受到炎癥刺激時,它們會分泌細胞因子,如腫瘤壞死因子(TNF)、IL-1IL-6IL-8和IL-12。雖然單核細胞和巨噬細胞是這些細胞因子的主要來源,但它們也由活化的淋巴細胞、內皮細胞和成纖維細胞產生。此外,巨噬細胞還會釋放趨化因子、白三烯和前列腺素。所有這些分子都可能誘導血管通透性增加和炎癥細胞的招募。除了局部效應外,這些介質還產生全身效應,如發熱和產生急性炎癥反應蛋白。
抗炎細胞因子

炎癥受到多種抑制劑和拮抗劑的嚴格調控。巨噬細胞釋放的抗炎細胞因子主要包括IL-10和TGF-β。

IL-10是一種35kD的細胞因子,由活化的巨噬細胞、B細胞和T細胞產生。它的主要作用是抑制巨噬細胞活化,以及TNF、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12和GM-CSF的產生。IL-10可抑制活化巨噬細胞MHC-II表達,因此是抗原呈遞的強效抑制劑。巨噬細胞本身也受到IL-10的影響,當巨噬細胞暴露于IL-10這種細胞因子會降低它們的殺微生物活性,并降低它們對IFN-γ的反應能力。

TGF-β與IL-10一起,是另一種強大的抗炎細胞因子,作用于許多靶細胞,并能調和TNF、IL-1β和IL-12等炎癥作用。TGF-β是Th1和Th2細胞的強效抑制因子,但卻能促進Tregs的功能。TGF-β還與造血有關,在胚胎發生、組織再生、細胞增殖和分化中具有重要作用。
趨化因子

趨化因子是一種特殊的肝素結合細胞因子家族,能夠在趨化作用的過程中引導細胞遷移。趨化因子在控制免疫細胞趨化方面起著至關重要的作用。此外,一些趨化因子在發育過程中發揮作用,促進血管生成,或引導細胞到組織中,為細胞的分化提供關鍵信號。巨噬細胞釋放的趨化因子主要包括CXCL1、CXCL2CCL5、CXCL8(IL-8)、CXCL9、CXCL10和CXCL11。


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熱滅活的血清適合培養巨噬細胞?


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