乙酸含量檢測試劑盒（高效液相色譜法 HPLC） 

貨   號：   BES-2625BTK 

規   格：   50T/48S 

有效期：   6個月 

儲存條件：2-8℃

產品簡介： 

乙酸，也叫醋酸、冰醋酸，化學式CH3COOH，是一種有機一元酸，為食醋內酸味及刺激 性氣味的來源。 乙酸在210 nm下有吸收峰，可以利用高效液相色譜法測定其含量。 

試驗中所需的儀器和試劑： 高效液相色譜儀(Polaris C18-A色譜柱(4.6×250 mm)，紫外檢測器(VWD))、臺式離心機、可調式移液槍、研缽/勻漿器、EP管(2 mL)、針頭式過濾器（水系），注射器，抽濾器，濾膜(水 系、有機系)，棕色進樣瓶(50個，1.5 mL)、超純水。 

產品內容： 

提取液：液體80mL ×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體2 mL ×1瓶, 4℃保存。 

試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存。 

標準品：1 mL×1支，4℃保存，8.75 mmol/mL乙酸標準品。 

實驗前準備工作： 

1、將一瓶試劑二溶解到1000ml超純水中，再加入0.9ml的試劑一，混勻，得到流動相A。 

2、將1000ml配置好的流動相A用濾膜抽濾，（配置好的流動相A采用0.22um水系濾膜抽濾）。 

3、將抽濾好的流動相A超聲20min，除去氣泡。

4、標準品的配置：將8.75mmol/ml的乙酸標準溶液用蒸餾水稀釋成175umol/ml、 87.5umol/ml、17.5umol/ml、8.75umol/ml、1.75umol/ml、0.875umol/ml的乙酸標準溶液。 （配置的標準品濃度僅供參考，客根據實際樣品濃度進行調整）。4℃避光保存（密封）， 測試前采用水系針頭式過濾器過濾到棕色進樣瓶內，待測。 

操作步驟：

1、乙酸的提取： 按質量（g）提取液體積（ml）1:5~10比例，建議稱取0.15g新鮮樣本，充分研磨碾碎，加入 1ml提取液，密封，混合均勻，置于75℃水浴鍋中浸取20min。混合兩次提取的提取液， 12000rpm離心10min，取上清液，測試前采用水系針頭式過濾器過濾到棕色進樣瓶內，待 測（若上清液顏色過深或者濃度過高，可稀釋后再次過濾待測）。 

2、測定步驟： 1、開啟電腦，打開液相色譜儀各模塊開關按鈕，安裝上色譜柱，打開軟件，在方法組中設 置進樣量為10ul，柱溫：30℃，流速為0.4ml/min，波長為210nm，走樣時間25min，設置完 畢保存方法組。 2、采用相應的流動相清洗柱子，用流動相A平衡柱子，待基線穩定后開始家樣。 3、檢測待測的標準貧農溶液，進樣量為10ul，在25min內可分離出乙酸，乙酸的保存時間為 13min左右（體系、柱子、流動相PH、溫度等不同，保留時間有差異，僅作為參考）。 4、檢測待測的樣品溶液，進樣量為10ul，在相應的保留時間處檢測乙酸的峰面積。 

3、乙酸含量計算： 以標準品濃度（umol/ml）為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制乙酸的標準曲線，將樣本的峰面 積帶入標準曲線，計算樣本中乙酸的濃度x（umol/ml）。 乙酸的含量（umol/ml）=X×V提取÷W=1.5×X÷W V提取：提取液的體積，1.5ml；W：樣本質量，g。稀釋后測試的樣本，需要乘以相應的稀 釋倍數，再進行計算。 

注意事項：

1、測試完畢之后，需要用高濃度的超純水相沖洗色譜柱（約20-30個柱體積），以防阻塞 色譜柱，再用高濃度的有機相沖洗色譜柱，最后按柱子的種類規范沖洗，防止損傷色譜柱。 

2、標準品的稀釋倍數要根據樣本中乙酸的濃度確定，樣品中乙酸的峰面積必須在不同濃度 的標準品溶液的峰面積之內，該標準品的稀釋倍數只是一個參考。若樣本中乙酸濃度過高， 建議可稀釋后再測。 

3、若樣本量過大，建議每天測試一次標準溶液（一個標準溶液即可），以確定相應的保留 時間，所有待測溶液測試前須放置室溫狀態