乙醇含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)（分光光度法） 

貨號(hào)：BES-673KT 

規(guī)格：50T/48S 

注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。 

測(cè)定意義： 

酒是含酒精（乙醇）飲料的統(tǒng)稱(chēng)，乙醇是酒的主要成分，是衡量酒質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。我 國(guó)是世界上最早發(fā)明釀酒的國(guó)家，也是酒類(lèi)產(chǎn)品消費(fèi)大國(guó)，其消費(fèi)量居世界之首。因此，快 速、準(zhǔn)確測(cè)定酒中乙醇含量，對(duì)于確保酒的質(zhì)量和保護(hù)消費(fèi)者的健康具有重大意義。 

測(cè)定原理： 

乙醇在乙醇脫氫酶的催化下氧化脫氫生成乙醛，同時(shí)，NAD 被還原生成 NADH，NADH 在 1-mPMS 的作用下使 WST-8 顯橙黃色，通過(guò) 450 nm 下測(cè)定吸光值變化可測(cè)得乙醇含量。 

需自備的儀器和用品： 

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。 

試劑的組成和配制： 

試劑一：液體 30 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 15 mL 試劑三充分溶解待用，用不完的試劑 分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融； 

試劑三：液體 20 mL×1 瓶，4℃保存； 

試劑四：液體 3mL×1 管， 4℃避光保存。 

乙醇提取： 

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組 織，加入 1mL 蒸餾水），進(jìn)行勻漿，8000g，25℃離心 10min，取上清待測(cè)。 

2. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量 （104 個(gè)）：蒸餾水體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 蒸餾水），超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）， 8000g，25℃離心 10min，取上清待測(cè)。 

3. 血清（漿）等液體樣品：直接測(cè)定。

測(cè)定步驟： 

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 450nm。 

2. 工作液的配制：臨用前按照樣本數(shù)量，按以下比例配制工作液。 

3. 樣本測(cè)定 按下表加入如下試劑。

混勻后記錄 450nm 下測(cè)定初始吸光值 A1，和 37℃避光孵育 10min 后的吸光值 A2，計(jì) 算△A=A2-A1 

乙醇含量計(jì)算： 

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0512x + 0.0055 R2 = 0.9991； x 為乙醇含量（μmol/mL），y 為吸光值差值△A。 

1.按照血清（漿）體積計(jì)算 乙醇含量（μmol/mL）= (△A-0.0055)÷0.0512 =19.5×(△A-0.0055) 

2.按照樣品質(zhì)量計(jì)算 乙醇含量（μmol/g 鮮重）= [ (△A-0.0055)÷0.0512×V1]÷(W ×V1÷V2） =19.5×(△A-0.0055)÷W 

3.按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算 乙醇含量（μmol/104 cell）= [ (△A-0.0055)÷0.0512×V1]÷（500×V1÷V2） =0.039×(△A-0.0055) V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.2mL；V2：加入提取液體積，1 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃 度，mg/mL； W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)；

注意事項(xiàng)： 

測(cè)定前取 1-2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，若△A﹥0.6 或乙醇含量﹥10μmol/mL，需將樣本用蒸餾水稀 釋后再測(cè)定，以確保測(cè)定的準(zhǔn)確性。 

最低檢測(cè)限：0.02μmol/mL